Zwischen dem 18. und dem 21. Tag übernimmt die Stockbiene vermehrt Arbeiten als Wächterin am Flugloch. Es ist der Übergang von der Stockbiene zur Flugbiene. Die Giftproduktion ist in den Tagen davor angestiegen und die Giftblase ist jetzt gefüllt. Ebenso ist die Produktion der Alarmpheromone angestiegen.

Wächterinnen halten sich vor oder direkt hinter dem Flugloch auf. Ist es breit genug, stehen sie auch im Flugloch und kontrollieren alle, die hinein wollen. Das können Schwestern sein, die den richtigen Geruch besitzen und problemlos passieren können. Das können Arbeiterinnen oder Drohnen eines anderen Volkes sein. Das können aber auch andere Insekten oder kleine Wirbeltiere wie Vögel oder Spitzmäuse sein.

Dem unerwünschten Besuch wird der Zutritt verweigert. Die Wächterinnen richten sich auf und greifen den Eindringling an. Dazu setzen sie auch ihren Giftstachel ein. Ist der Eindringling zu mächtig, dann geben sie ein Alarmpheromon ab und rufen weitere Bienen zuhilfe.